特異性免疫球蛋白 Y 治療急慢性咽炎的療效觀(guān)察

謝民強　蒙永祥 　李仲漢 　李永奇 　張扣興 　趙曉明 　熊?chē)?　陳勇明

     【摘要】　目的　評價(jià)特異性免疫球蛋白 Y 治療急慢性咽炎的有效性和安全性。 方法　50 例單獨接受特異性免疫球蛋白 Y 噴劑或同樣劑量安慰劑治療的成人急性咽炎采用隨機雙盲、安慰劑對照分組;另外急、慢性咽炎各25 例開(kāi)放試驗組單獨接受特異性免疫球蛋白 Y 噴劑治療。 療程均為 7 d,急性咽炎治療 3 d 后如癥狀無(wú)改善或加重者視為無(wú)效, 并加用抗生素治療。 以癥狀、體征記分, 按顯效、有效、無(wú)效評價(jià)療效。 結果　雙盲組中, 接受 IgY 治療患者顯效 8 例(32%), 有效 13 例(52%), 無(wú)效 4例(16%);安慰對照者顯效 2 例(8%), 有效 5 例(20%), 無(wú)效 18 例(72%), 兩組比較差異有非常顯著(zhù)性(χ2 =16.06, P<0.01)。 開(kāi)放試驗組中, 顯效 19(38%)例, 其中急性占 14 例, 有效 23(46%)例, 急性占 10 例, 無(wú)效 8(16%)例, 急性占 1 例, 急慢性?xún)山M比較療效差異有顯著(zhù)性。(χ2=8.90, P <0.05), 隨訪(fǎng) 3個(gè)月未發(fā)現毒副作用及過(guò)敏反應。 結論　特異性 IgY 口腔噴劑治療急慢性咽炎安全、有效, 對急性咽炎的療效優(yōu)于慢性咽炎。

     【關(guān)鍵詞】　咽炎;　免疫球蛋白類(lèi);　隨機對照試驗;　革蘭氏陽(yáng)性菌

Effect of specific immunoglobulin Y in the treatment of acute and chronic pharyngitis 　XIE Min-qiang＊ ,MENG Yong-xiang , LI Zhong-han, LI Yong-qi , ZHANG Kou-xing , ZHAO Xiao-ming,XIONG Guo-jun, CHEN Yong-ming＊Department of Otorhinolaryngology , Third AffiliatedHospital, Sun Yet Sen University , Guangzhou 510630 , ChinaCorresponding author:XIE Min-qiang, Email :min_qiang_x @hotmail.com

    【Abstract】　Objective　To evaluate the effect and safety of the specific immunoglobulin Y (IgY)fortreatment of acute and chronic pharyngitis.Methods　Double-blind, randomized, placebo-controlled trialwas conducted on 50 adults with acute pharyngitis.Experimental group received a 6 times-daily total 30doses of IgY stomat-spray which contained specific immunoglobulin Y (titer=512)prepared from the eggyolk of hensimmunized with a variety of bacteria.Another open label trial included 50 patients, whose agesranged from 21-69 years, including 25 cases of acute pharyngitis and 25 cases of chronic pharyngitis werealso treated using gYstomatspray.Thetherapeutic effect were objectively evaluated 7 days later by thedecreased scores based onboth the symptomsandphysicalsigns.If the symptom did not improve or becamesevere three days later, these patients with acute pharyngitis wasinefficiency and antibiotic medicine would be added to them.Results　In Double-blind trial, 8 cases(32 %)received IgY had apparent effect with the decreased scores 5 or more than 5, 13 cases(52%)had effective with the decreased scores 3-4, and other 4 cases(16%)had inefficacy with the decreased scores only 2 or no more than 2.While in placebo-controlled group, only 2 (8 %)cases had apparent effect, 5(20%)casesshowed effective and 18(72%) cases had noeffect.The difference between the two groups was significant (χ2=16.06, P <0.01).Inopen label trial, 19 cases(38%)showed apparent effect, in which 14 cases were acute pharygitis.23 cases(46%)had effective, in which 10 caseswere acute pharyngitis.The left 8 cases(16%)hadineffective, inwhich one case was acute pharyngitis.There was significantly difference (χ2=8.90, P <0.05)betweenacute pharyngitis and chronicpharyngitis.An average of three months followup showed that there were noside effect or toxic effect and no allergic reaction.Conclusion　The IgY stomat -spray is a safe and effective agent in treating acute and chronic pharyngitis, especially for acute pharyngitis.

作者單位:510630 廣州, 中山大學(xué)附屬第三醫院耳鼻咽喉科(謝民強、李仲漢、李永奇);廣東省大日生物化學(xué)藥業(yè)有限公司(蒙永祥);廣州中山大學(xué)附屬第三醫院呼吸內科(張扣興);暨南大學(xué)醫學(xué)院附屬第三醫院耳鼻咽喉科

(趙曉明、熊?chē)?;廣東省順德市人民醫院耳鼻咽喉科(陳勇明)

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中華耳鼻咽喉科雜志 2004 年2 月第 39 卷第 2 期　Chin J Otorhinolaryngol, February 2004, Vol 39, No .2

　　【Key words】　Pharyngitis;　Immunoglobulins;　Randomized controlled trials;　Gram-positive

bacteria

　　   急慢性咽炎是耳鼻咽喉科常見(jiàn)病, 部分為細菌感染引起,也與局部免疫狀態(tài)有關(guān)。雖然急性期應用抗生素治療有肯定的效果, 但本病常反復發(fā)作, 而且轉變?yōu)槁詣t治療十分棘手 。我們自 2002 年 7月開(kāi)始采用抗生素替代物———特異性免疫球蛋白 Y口腔噴劑治療急慢性咽炎 ,效果滿(mǎn)意,報告如下。

資料與方法

        一 、病例資料

        2002 年 7 月 ～ 2003 年 4 月中山大學(xué)附屬第三醫院耳鼻咽喉科 、暨南大學(xué)醫學(xué)院附屬第三醫院耳鼻咽喉科和廣東省順德市人民醫院耳鼻咽喉科門(mén)診志愿受試患者, 所有納入病例半月內未用抗生素, 不伴急性化膿性炎癥, 體溫不超過(guò) 38℃。除耳鼻咽喉常規檢查外 ,加作血常規 、X 線(xiàn)胸部透視和咽拭子細菌培養 ,排除其他特殊感染,X 線(xiàn)胸部透視異常者不進(jìn)入研究,總共 110 例 。其中 8 例在規定復查時(shí)間內失訪(fǎng),2 例自行合用了其他藥而退出研究, 實(shí)際完成試驗 100 例。急性發(fā)病 ,以咽痛為主 ,檢查見(jiàn)咽黏膜急性充血或伴水腫 、潰瘍者診斷為急性咽炎 ;慢性起病 ,咽異物感 、多痰 、咽癢、咽干、輕微咽痛, 檢查見(jiàn)咽黏膜慢性充血 、表面黏液附著(zhù)或淋巴濾泡增生者則診斷為慢性咽炎。50 例急性咽炎進(jìn)行雙盲試驗 :男 30 例, 女 20 例;年齡 18～ 56 歲 ,平均 33.4 歲;病程 1 d 4 例, 2 d 12 例 ,3 d 26 例, 4 d 2 例 ,7 d 6 例 ;將所有臨床資料編入觀(guān)察表, 采用隨機數字表法, 每個(gè)患者的觀(guān)察表編號與廠(chǎng)家提供的藥物編號一致 。另 50 例為開(kāi)放試驗組 :男 33 例 , 女 17 例 ;年齡 21～ 69 歲 ,平均 33.1 歲 ;其中急性咽炎或伴牙齦炎或伴潰瘍 15 例, 慢性咽炎急性發(fā)作 10 例 ,病程 2 ～ 5d,作為急性咽炎組;慢性咽炎 25 例, 病程 3 個(gè)月～10 年,作為慢性咽炎組 ,兩組給同樣的已知治療藥。
        二、用藥方法

       采 用 美 國 雅 臣 藥 業(yè) 集 團 (Jason MedicalHoldings Inc .USA)和廣東省大日生物化學(xué)藥業(yè)有限公司聯(lián)合研制的用葡萄球菌 、溶血性鏈球菌 、流感嗜血桿菌 、大腸桿菌等多種革蘭陽(yáng)性球菌、革蘭陰性桿菌和白色念珠菌免疫的雞蛋黃中提取的特異性IgY, 制成水溶性薄荷味噴霧劑(效價(jià)為 512), 口咽噴入 ,每日噴 6 次,每次 5 噴, 噴入時(shí)深吸氣, 噴藥后10 min 內不飲水 , 不進(jìn)食, 連用 7 d ,不合用其他任何治療 ,安慰劑除不含 IgY 外與治療藥在劑型 、成分、顏色 、氣味 、包裝上完全相同, 治療藥與安慰劑由制藥公司采用隨機數字表法編號 , 該編號與受試病例編號一致。以癥狀、體征記分的方法評價(jià)療效 ,急性咽炎治療 3 d 后如癥狀無(wú)改善或加重者視為無(wú)效, 并加用抗生素治療。試驗結束后評價(jià)療效 ,隨機雙盲試驗由制藥公司和參加試驗單位一起開(kāi)盲分組, 進(jìn)行統計學(xué)處理 。開(kāi)放試驗的目的是比較急慢性咽炎的療效差別, 制藥公司 、參加試驗的醫務(wù)人員和受試患者對藥物均知情 。

        三、記分辦法

1.癥狀 :咽痛重 2 分, 輕 1 分 ;咽干 1 分;咽異物感 1 分;痰多 1 分;其他(咳嗽 、咽癢 、自覺(jué)咽喉燒灼感等)1分 。

2.體征 :咽部急性充血 2 分 ,慢性充血 1 分;有分泌物 1 分;其他(如黏膜腫 、牙齦腫、潰瘍)1 分;體溫升高 2 分;外周血白細胞升高 2 分;細菌培養有致病菌生長(cháng) 2 分 。

3.療效判斷標準 :治療后記分減少 5 分或以上者為顯效 ;減少 3 分和 4 分者有效 ;等于或小于 2 分者無(wú)效。

        四、特異性 IgY 體外抑菌活性

        取中山大學(xué)附屬第三醫院急性呼吸道感染患者分泌物中分離的 92 株細菌進(jìn)行特異性 IgY 體外抗菌活性測定,采用平板二倍稀釋法 , IgY 效價(jià)分別為512 、256 、128 、64、32,質(zhì)控菌株購自中國軍事醫學(xué)科學(xué)院 。
        五、IgY 電泳分析

        取常溫保存和 55℃處理的 IgY 按效價(jià) 512 稀釋, 聚丙烯酰胺電泳,考馬斯亮藍染色 。

        六、統計學(xué)方法

        行列表的卡方檢驗 。

        結 果

1. 用藥后 2 d 開(kāi)始起效 ,黏膜潰瘍用藥 3 d 后疼痛緩解 ,開(kāi)放試驗組用藥前后癥狀體征變化詳見(jiàn)圖 1。按照上述療效判斷標準 ,用藥 7 d 后, 隨機試驗組中, 治療組總有效率84%, 安慰劑組總有效率
   
   

   圖1　開(kāi)放試驗組 50 例急慢性咽炎特異性 IgY 治療前后癥狀、體 征出現率變化 28%,安慰劑組中病程 7 d者占 4 例 ,兩組療效比較 差異顯著(zhù)(χ 2 =16.06 , P <0.01), 詳見(jiàn)表 1;開(kāi)放試 驗組中, 急性組總有效率 96%, 慢性組總有效率 74%,兩組療效比較差異有顯著(zhù)性(χ 2 =8.90 , P < 0.05),詳見(jiàn)表 2, 未發(fā)現毒副作用和過(guò)敏反應。
   

   
   

   2.慢性咽炎抽查血常規 17 例, 無(wú) 1 例異常 ;急 性咽炎抽查 17 例,6 例(35.3%)外周血白細胞數高 于 10×10 9 / L 。
   

   3.咽拭子培養 25 例 ,培養出 4 株致病菌 ,2 株 金黃色葡萄球菌 ,2 株銅綠假單孢菌, 其中 1 株金黃 色葡萄球菌對特異性 IgY 敏感。特異性 IgY 體外 抗菌活性見(jiàn)表 3。
   

   4.特異性 IgY 電泳結果(圖 2):抗菌多克隆 IgY 具有 6條帶, 相對分子量約為 31 000 ～ 66 000 , 常溫和 55℃處理的標本帶形基本一致, 表明 IgY 耐 熱。
   

   
   

   
   

   
   

   
   

   注:MIC50 為 50%菌株被抑制的最小藥物濃度, MIC90 為 90%菌株被抑制的最小藥物濃度。 質(zhì)控菌:肺炎雙球菌(ATCC49619)效價(jià) 256, 金 黃 色 葡 萄 球 菌(ATCC29213)效 價(jià) 512, 大 腸 桿 菌(ATCC25922)效價(jià) 512

   討 論

   　　早在 60 年代就發(fā)現雞卵黃中存在免疫球蛋白G 抗體(IgG), 它是母雞受抗原刺激后所產(chǎn)生的IgG ,在卵黃成熟期選擇性地從血清中轉移到卵黃(Yolk)內 ,因此又稱(chēng) IgY,是卵黃中惟一的一類(lèi)免疫球蛋白[ 1]含量與雞血清中的 IgG 相近。后來(lái)的研究發(fā)現,用病毒或細菌免疫母雞后特異性 IgY 的含量顯著(zhù)增高, 達到 9.4mg/ml 雞蛋黃[ 2]但由于脂質(zhì)體的影響, 當時(shí)分離純化 IgY 很困難 。1980 年P(guān)olson 等 [ 3] 首先發(fā)現用 3.5 %聚乙二醇可將卵黃蛋白與脂質(zhì)體分離后, 近 20 年來(lái) IgY 的研究已取得了很大的進(jìn)展[ 4 , 5]。特別是在免疫治療方面, 由于雞抗體耐酸[ 6]耐熱 [ 2] ,性能穩定 ,不激活補體, 不與哺乳動(dòng)物 Fc 受體結合 [ 7] , 因此不會(huì )導致由此引起的炎癥反應 , 可局部應用預防或治療口腔[ 8 , 9]或上呼吸道感染 。體外試驗表明相應的 IgY 對腸道致· 114 ·中華耳鼻咽喉科雜志 2004 年2 月第 39 卷第 2 期　Chin J Otorhinolaryngol, February 2004, Vol 39, No .2病菌有抑制作用 [ 10] , 因此也可用于預防或治療胃腸道感染[ 2, 7]。特別是 Sarker 等[ 11]采用抗輪狀病毒雞卵黃免疫球蛋白口服, 治療嬰兒輪狀病毒感染所致腹瀉, 獲得了令人鼓舞的結果, 為 IgY 的臨床應用提供了直接的證據, 但 IgY 的合適治療劑量和抗體中和滴度的確定卻是沒(méi)有解決的問(wèn)題 。我們根據92 株致病菌體外試驗結果確定了 IgY 的有效治療量,其效價(jià)不能低于 512
   

          急性咽炎和慢性咽炎急性發(fā)作主要表現為咽痛和咽充血 ,感染是其直接原因 ,常規治療以全身抗感染為主。慢性咽炎癥狀多樣, 病因復雜 ,無(wú)論慢性單純性咽炎 、慢性肥厚性咽炎還是萎縮性咽炎, 局部黏膜感染性炎癥仍然是其主要病理特征, 治療方法雖然很多 ,但效果均不佳。本研究采用的口腔噴霧劑的有效成分是針對多種咽喉常見(jiàn)致病菌的多克隆抗體 IgY ,其抗菌機理是 IgY 與致病菌特異性結合后細菌表面結構改變, 阻斷了細菌與人體細胞的黏附 ,細菌與宿主的物質(zhì)交換受到影響 ,導致細菌生長(cháng)抑制,這是特異性 IgY 的直接作用;同時(shí)細菌表面構象和(或)細胞膜電場(chǎng)的改變類(lèi)似于免疫調理作用 ,便于宿主白細胞和巨噬細胞吞噬細菌, 這是特異性IgY 的間接作用。IgY 體外抗菌活性測定結果證實(shí)對常見(jiàn)致病球菌如金黃色葡萄球菌、凝固酶陰性葡萄球菌、肺炎雙球菌、A 群溶血性鏈球菌、腸球菌等有一定的抗菌作用, 其中以對肺炎雙球菌、A 群溶血性鏈球菌抗菌活性最佳, 對卡他莫拉菌 、流感嗜血桿菌和標準菌株大腸桿菌亦有一定作用, 對其他球菌如本組培養出的一株耐藥金黃色葡萄球菌也有部分抑制作用 ,但對其他革蘭陰性桿菌均沒(méi)有抗菌活性 。體外實(shí)驗只反應了 IgY 的直接抑菌作用, 而在體內應用則具有上述雙重作用。Carlander[ 12]最近研究發(fā)現, 19 例自愿受試者晚上用 IgY 溶液含漱 1 ～ 2min,第 2 日上午 18 例還能從唾液中檢測到活性抗體,表明 IgY 可在局部滯留較長(cháng)時(shí)間 。本組 50 例急性咽炎, 隨機雙盲研究結果顯示 IgY 治療的總有效率達到 84%, 遠高于安慰對照(28 %), 也高于開(kāi)放試驗組中慢性咽炎的總有效率(74%), 提示特異性 IgY 對咽喉部急性細菌感染性黏膜炎癥療效較好。而且我們發(fā)現用藥 3 d 后隨咽部炎癥控制 ,外周血白細胞也跟著(zhù)下降 。但值得一提的是, 無(wú)論雙盲試驗還是開(kāi)放試驗, 急性咽炎治療的顯效率分別也只有 32%和 56%,因此對于較嚴重感染的患者則只能作為輔助治療藥物 。安慰組有效率較高 , 其中4 例就診時(shí)已患病 7 d ,我們考慮可能系自然病程的影響 。

               特異性 IgY 是針對致敏的致病菌的 ,因此長(cháng)期使用一般不會(huì )影響正常菌群生長(cháng)。 正如 Sarker等 [ 11] 所指出的, 我們每日都吃雞蛋 , 口服 IgY 是安全的 ,本組 100 例隨訪(fǎng)至今尚未發(fā)現任何毒副作用及過(guò)敏反應。肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌和卡他莫拉菌是成人慢性支氣管炎急性發(fā)作和膿痰的常見(jiàn)病因, 本研究采用的特異性 IgY 對這些細菌敏感 , 我們在對伴發(fā)急性咽炎的這類(lèi)患者應用該藥治療過(guò)程中發(fā)現患者咳嗽和膿痰很快控制 , 是否可作為輔助治療藥物尚待擴大病例進(jìn)一步證實(shí)。

參 考 文 獻

1 Loeken MR, Roth T F.Analysis of maternal IgG subpopulationswhich are transported into the chicken oocyte.Immunology , 1983,49:21-28.

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4 Gutierrez Calzado E, Garcia Garrido RM , Schade R.Humanhaemoclassification by use of specific yolk antibodies obtained afterimmunisation of chickens against human blood group antigens.Altern Lab Anim, 2001,29:717-726.

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8 Hatta H, T suda K , Ozeki M , et al.Passive immunization againstdental plaque formation in humans:effect of a mouth rinsecontaining egg yolk antibodies (IgY) specific to Streptococcusmutans.Caries Res, 1997, 31:268-274.

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10 Lee EN , Sunwoo HH, Menninen K , et al.In vitro studies ofchicken egg yolk antibody (IgY)against Salmonella enteritidis andSalmonella typhimurium.Poult Sci, 2002, 81:632-641.

11 Sarker SA , Casswall TH, Juneja LR, et al.Randomized, placebo-controlled, clinical trial of hyperimmunized chicken egg yolkimmunoglobulin in children with rotavirus diarrhea.J PediatrGastroenterol Nutr, 2001, 32:19-25.

12 Carlander D, Kollberg H, Larsson A.Retention of specific yolkIgY in the human oral cavity .Bio Drugs, 2002, 16:433-437.

(收稿日期:2003-05-13)

(本文編輯:何膺遠)